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细胞冻存实验步骤
日期:2024-04-29 11:28
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摘要:细胞冻存实验步骤
实验步骤:
1. 制备冻存液,冻存液比例:本实验室采用70%基础培养基+20%FBS+10%DMSO,不同实验室及不同细胞可能略有差异,也可采用55%基础培养基+40%FBS+5%DMSO;
2. 取形态良好,处于对数生长期的细胞,对其消化、离心 (1500rpm离心8min)、计数;
3. 根据细胞数量加入对应的冻存液,使细胞密度维持在300-500w/mL;
4. 小心用镊子打开冻存管管盖,每管分装1-1.5mL含细胞的冻存液,拧紧盖管,做好标记。
5. 分装好的冻存管转入程序降温盒后直接放-80℃过夜;
6. 若没有程序降温盒,则按下列顺序依次降温:室温→4℃20min→-20℃30min→-80℃过夜,注意转移过程中要保冷,避免产生温差或冻存管融化;
7. 从-80℃冰箱取出冻存管迅速转移到液氮长期保存。