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细胞长期保存具体操作
日期：2025-06-16 22:50
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摘要：
细胞长期保存的方法主要包括低温冷冻和超低温冷冻两种方式。其中，低温冷冻通常使用80℃的超低温冰箱，而超低温冷冻则利用液氮达到196℃的温度，这是目前有效的细胞长期保存方法。具体操作如下：
1. 细胞准备：选择处于对数生长期的细胞，状态良好且无污染。在冻存前1天更换新鲜的完全培养基，确保细胞处于合适生长状态。
2. 冻存液配制：一般使用含有90%完全培养基和10%二甲基亚砜（DMSO）的冻存液。DMSO需预冷至4℃以下，确保其质量和纯度。
3. 细胞收集与洗涤：用预热至37℃...
细胞长期保存的方法主要包括低温冷冻和超低温冷冻两种方式。其中，低温冷冻通常使用80℃的超低温冰箱，而超低温冷冻则利用液氮达到196℃的温度，这是目前有效的细胞长期保存方法。具体操作如下：
1. 细胞准备：选择处于对数生长期的细胞，状态良好且无污染。在冻存前1天更换新鲜的完全培养基，确保细胞处于合适生长状态。
2. 冻存液配制：一般使用含有90%完全培养基和10%二甲基亚砜（DMSO）的冻存液。DMSO需预冷至4℃以下，确保其质量和纯度。
3. 细胞收集与洗涤：用预热至37℃的PBS缓冲液轻轻冲洗细胞23次，去除残留的培养基和血清。
4. 细胞计数与分装：将细胞收集后，计数并根据需要分装到冻存管中，每管一般含有12ml的细胞悬液。
5. 冻存程序：采用程序化降温或直接快速冷冻的方法。程序化降温通过控制降温速率，减少冰晶形成对细胞的损伤。直接快速冷冻则迅速将细胞降至196℃，适用于某些对冰晶敏感的细胞。
6. 存储：将冻存管存入液氮罐中，利用液氮的深低温环境，使细胞的代谢活动几乎完全停止，从而长期保持细胞的活性。
细胞在196℃的深低温下可以实现长期保存，理论上可以冻存数十年甚至更久，如免 疫细胞在该条件下可以维持其生物学活性。然而，具体保存年限取决于细胞类型、冻存方法及冻存后的复苏效果。现代细胞储存技术已非常成熟，确保了细胞在长期保存后的活力和功能。