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提高qPCR反应的灵敏度与特异性方法
日期：2025-05-01 22:17
浏览次数：497
摘要：
提高qPCR反应的灵敏度与特异性方法：
1、首先确定模板RNA完整性好，无DNA污染。
2、RNA模板中不应含有扩增反应抑制剂。
3、为了防止模板降解，在反应体系中加入RNase抑制剂RNasin。
4、使用适量的模板RNA，模板量太多会降低特异性，太少会导致扩增不出条带或条带太弱。
5、若模板中有二级结构，可通过提高逆转录反应温度来提高扩增效果。
6、设计引物时，避免在引物3’端含有互补序列，避免形成内部发卡结构。
提高qPCR反应的灵敏度与特异性方法：
1、首先确定模板RNA完整性好，无DNA污染。
2、RNA模板中不应含有扩增反应抑制剂。
3、为了防止模板降解，在反应体系中加入RNase抑制剂RNasin。
4、使用适量的模板RNA，模板量太多会降低特异性，太少会导致扩增不出条带或条带太弱。
5、若模板中有二级结构，可通过提高逆转录反应温度来提高扩增效果。
6、设计引物时，避免在引物3’端含有互补序列，避免形成内部发卡结构。