ELISA常见样品制备方法

一、细胞培养物上清液

1、将培养基移至离心管， 4℃， 1,500 rpm 离心 10 分钟。

2、立即进行上清液的分装（血清）并在 -80℃ 下保存样品。尽可能减少反复冻融次数

二、细胞提取物

1、将组织培养板放置在冰上

2、吸出培养基并用预冷PBS 轻轻洗涤细胞一次

3、吸出 PBS ，加入100 mm 培养板加入0.5ml完全提取缓冲液

4、收集细胞至在倾斜板中，然后移至经过预冷的离心管中。

5、短暂涡旋后在冰上孵育 15-30 分钟

6、在 4℃ 下13,000 x rpm 离心 10 分钟，沉淀不溶性内容物

7、将上清液（这里是指可溶性细胞提取物）分装至预冷的离心管中，并于 -80℃ 保存。尽可能减少反复冻融次数。

三、条件培养基

1、将细胞接种到完全（含血清）生长培养基中，使细胞增殖达到一定的融合率。

2、弃去培养基，数毫升预热PBS 小心洗涤。重复洗涤步骤。

3、弃去PBS 洗涤液并小心加入无血清培养基。

4、孵育 1-2 天。

5、将培养基移至离心管， 4℃ 1,500 rpm 离心 10 分钟。

6、立即分装上清液（血清）并在 -80℃ 下保存样品。尽可能减少反复冻融次数。

四、乳汁

1、收集样品并在 4℃ 下以 10,000 x g 离心 2 分钟。

2、分装上清液并在 -80℃ 下保存样品。尽可能减少反复冻融次数。

五、血浆

1、将全血收集到含抗凝剂的管中，例如 BD 抗凝真空采血管（目录号：363080/363080）或添加 0.1M 柠檬酸钠至 1/10 终体积。

2、4℃ 3,000 rpm 离心 10 分钟。

3、立即分装上清液（血浆）并在 -80℃ 下保存样品。尽可能减少反复冻融次数。

六、尿液

1、收集样品并在 4℃ 下以 10,000 x g 离心 2 分钟。

2、等分上清液（血清）并在 -80℃ 下保存样品。尽可能减少冻融循环次数

七、唾液

1、收集样品并在 4℃ 下以 10,000 x g 离心 2 分钟。

2、立即分装上清液（血浆）并在 -80℃ 下保存样品。尽可能减少反复冻融次数。

八、血清

1、将全血收集到未经处理的测试管中，或者到不含抗凝剂的管中，如 BD 血清用真空采血管（目录号：367812)。

2、在室温下连续孵育 20 分钟。

3、4℃ 3,000 rpm 离心 10 分钟。

4、立即分装上清液（血浆）并在 -80℃ 下保存样品。尽可能减少反复冻融次数。

九、组织提取物

1、用干净的工具解剖组织，*好在冰上、尽快进行，以防止被蛋白酶降解。

2、将组织置于圆底的微量离心管中，并浸入液氮中进行“速冻”。将样品保存在 -80℃ 下以便后续使用或放置在冰上进行直接匀浆。

3、对于约 5 mg 的组织片，可向管中添加约 300 µl 完全提取缓冲液（查看细胞/组织提取缓冲液配方），然后用电动匀浆器匀浆。

4、清洗刀片两次，每次清洗使用 300µl 完全提取缓冲液，然后在 4℃ 下维持恒定搅拌 2 小时（例如置于冷室中的回旋振荡器上）。

5、4℃ 13,000 x rpm 离心 20 分钟。置于冰上，将上清液（这里是指可溶的蛋白质提取物）分装至新、预冷的管中并在 -80℃ 下保存样品。尽可能减少反复冻融次数。